新的一年，上海恒遠技術專員為ELISA試劑盒新手入門的使用技術報告做出一番整理，在這里分享給您，僅供參考。

ELISA試劑盒方法原理

  一、雙抗體夾心法測定抗原

1.將抗原免疫*種動物獲得的抗體吸附于固相表面;

2.加抗原，形成抗原-抗體復合物; 

3.加抗原免疫第二種動物獲得的抗體，形成抗體抗原抗體復合物;

4.加酶標抗抗體(第二種動物抗體的抗體); 

5.加底物。底物的降解量＝抗原量。

二、直接法測定抗原 

1.將抗原吸附在載體表面；

2.加酶標抗體，形成抗原—抗體復合物；

3.加底物。底物的降解量＝抗原量。 

三、間接法測定抗體

1.將抗原吸附于固相載體表面；

2.加抗體, 形成抗原-抗體復合物；

3.加酶標抗體；

4加底物。 測定底物的降解量＝抗體量。

ELISA試劑盒操作注意

1. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

2.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

3.底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

4.試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。

5.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7.使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9.洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10.底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11.加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

12.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

ELISA試劑盒質(zhì)控分析

  1.人員培訓內(nèi)容包括：①檢驗項目的基本原理(ELISA試劑盒原理)；②熟悉檢測技巧，了解易出差錯的環(huán)節(jié)及難點；熟悉檢測試劑性能(包括試劑盒組成，包被片段及其組成)；③熟悉檢測儀器的原理及性能;掌握數(shù)據(jù)處理的能力和質(zhì)量控制知識；④某些特殊項目的檢測如抗HIV等需經(jīng)有關部門組織的專門培訓班，考試合格后持證上崗。

  2.基本了解

1971年Engvall等人把免疫組化的EIA技術應用于臨床檢驗發(fā)展為ELISA試劑盒技術。

2.特點：ELISA試劑盒在固相表面組裝免疫活性物質(zhì)形成"免疫吸附劑"。

3.酶標記免疫活性物質(zhì)，進行信號放大；

4.有二步溫育反應二次洗滌過程；

5.靈敏度特異性相對較高。

6.局限性：只能檢測到ng水平

7.精密度差(批內(nèi)CV15-20%)；

8.線性范圍窄(一個數(shù)量級)；

9.存在"HD-HOOK"效應。 

    以上由上海恒遠生化試劑有限公司技術人員整理，希望對新手朋友有所幫助，還需要了解更多詳細內(nèi)容可以我們。